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新型冠狀病毒實驗室快速檢測

2019新型冠狀病毒,即“2019-nCoV”,因2019年武漢病毒性肺炎病例而被發現,2020年1月12日被世界衛生組織命名。

據鐘南山院士表示:此次疫情集中在武漢的兩個區,這兩個區都有比較大的海鮮市場。說是海鮮市場,這里相當多的不是海鮮,而是野味,初步經過流行病學分析,通過野生動物傳染給人有比較大的可能,目前已經證實了有人傳人和醫務人員感染的情況。新型冠狀病毒的感染正在爬坡,但是相比SARS傳染性沒那么強。

因此請各實驗室特別注意生物安全防護,尤其是必須選配生物安全柜進行防護。

新型冠狀病毒感染的癥狀包括:
前期一般癥狀:1、發熱,主要表現為跟普通感冒類似的發燒等;2、乏力,感覺到四肢無力,很沒有力氣的感覺;3、干咳;4、感受到呼吸逐漸變得困難,這也是與普通感冒最大的區別。

后期較為嚴重的時候,表現為急性呼吸窘迫綜合征,如果拖的時間長或者非常嚴重的時候,則表現為感膿毒癥休克,其中還有一種最主要的表現就是難以糾正的代謝性酸中毒,這種表現是無法通過日常觀察所得出的,最后一種在醫學上主要的表現形式是出凝血功能障礙。

- 診斷方法 -

目前臨床標本病毒常規的檢測方法包括:
1、血清學檢測:血清特異性抗體,如ELISA、免疫熒光等方法檢測;中和抗體:采用空斑減少中和試驗方法檢測;
2、病原學檢測:
A:核酸檢測:采用熒光定量RT-PCR方法;
B:病毒分離:將標本進行分離培養,出現病變以后,用檢測核酸的方法鑒定病毒。

其中熒光定量PCR檢測方法具有以下優點:
1、高靈敏性:可檢測單個細胞基因
2、高特異性和精確性
3、操作簡便、速度快:通過計算,PCR擴增、產物檢測和定量分析一體化
4、安全、無污染,在全封閉狀態下進行PCR擴增和產物分析
5、結果觀測重復性好,在線實時觀測,結果判斷直觀,避免人為因素干擾,特別適合早期檢測

自2020年1月10日基因序列測序完成后,各家體外診斷公司可以此為基礎,研發出核酸檢測試劑盒,如華大基因、達安基因、萬孚生物、碩世生物等上市公司均公開表示相對應的檢測試劑盒已開發成功,上述產品僅用于對新型冠狀病毒以及其他冠狀病毒的檢測。

根據WHO發布的《疑似 2019 新型冠狀病毒感染病例實驗室檢測臨時指南》,新型冠狀病毒PCR檢測基本過程如下:
1、標本收集:同時收集上呼吸道(upper respiratory tract,URT,包括鼻咽和口咽)和下呼吸道(lower respiratory tract,LRT,包括痰、氣管內吸出物或支氣管肺泡灌洗液)的標本,通過RT-PCR進行nCoV檢測。在下呼吸道樣本易于獲得的情況下(例如機械通氣的患者,臨床醫生可以選擇僅收集下呼吸道樣本):使用適當的PPE進行標本收集(注意URT標本的液滴和接觸預防措施,以及LRT標本的空氣預防措施)。收集URT樣品時,使用病毒采樣棉簽(無菌滌綸或人造絲,而不是棉花)和病毒運輸介質。不要從鼻孔或扁桃體上采樣。對于懷疑患有nCoV的患者,特別是患有肺炎或嚴重疾病的患者,單個URT樣本不能排除診斷,建議增加URT和LRT樣本。LRT(相對于URT)樣本更可能呈陽性,且如4.1所述,在下呼吸道樣本易于獲得的情況下(例如機械通氣的患者),臨床醫生可以選擇僅收集下呼吸道樣本)。

2、核酸提取:采用核酸提取儀或手工提取核酸。
2.1 核酸提取和樣本分離所需設備和耗材:
生物安全柜(作用:樣本分離,提供人員、樣本和環境保護)、臺式高速冷凍離心機(作用:轉速≥12000RPM,分析核酸等)、低溫冰箱(作用:試劑儲存)、金屬浴、移液器(作用:精準加樣)、滅菌離心管(作用:分離核酸等)、乳膠手套(作用:防污染)、無水乙醇、異丙醇、無DNase和RNase水(非DEPC處理水)。


生物安全柜選購時注意:由于是直接的人員安全防護設備,屬三類醫療器械,建議選購一線品牌產品,如HealForce的HFsafe-1200LC,如有條件可選擇細胞毒素安全柜,多重安全過濾,操作區潔凈度等級更高,如HFsafe-12CY、KSP系列。


全自動核酸提取選購時注意:根據樣本量選擇適合通道主機、重點關注磁珠提取技術。


高速冷凍離心機選購時注意:選冷凍型、生物安全防護轉子,如Neofuge13R。


低溫冰箱選購時注意:報警功能完善、溫控精準,容積合適的,如HTLTP/MDF系列


超純水機選購時注意:選擇帶進口超濾,制水量10-15L即可,如Smart Plus NT系列

其他選購注意事項:1-10ul規格的移液器建議選購Eppendorf品牌。

2.2、操作步驟:
由于各家試劑公司操作步驟有一定差異,建議按試劑盒說明書操作,一般包括:試劑準備、分離操作、樣本保存等。

3、實時熒光定量PCR檢測:
3.1 所需設備和耗材:生物安全柜(作用:樣本制備,提供人員、樣本和環境保護)、熒光定量PCR儀(作用:PCR擴增和檢測分析)、臺式高速冷凍離心機(作用:轉速≥12000RPM)、低溫冰箱(-86℃樣本儲存,-20℃和4℃試劑儲存)、振蕩器、移液器(作用:精準加樣)、滅菌離心管(0.5/1.5/2ml)、0.2ml光學級PCR管/板(作用:PCR反應管)、乳膠手套(作用:防污染)。

3.2 所需試劑:建議華大基因、達安基因、萬孚生物、碩世生物等上市專業試劑公司的試劑,請注意臨床使用的需選擇具有注冊證的試劑產品。核酸提取、反應體系配置、結果判讀等均以試劑盒說明書為準。


X960全自動醫用PCR分析系統

- PCR實驗室建設所需主要儀器設備 -

 

- PCR實驗室及主要設備圖片參考 -


- 主要產品特點介紹 -
 1、全自動核酸提取儀
本系統是臺灣圓點奈米技術股份有限公司生產的核酸自動提取儀,Smart LabAssist-32儀器操作自動化且快速、簡便。利用96孔板預裝反應盤,同時可提取1-32個標本。搭配不同種類的磁珠核酸提取試劑,可以提取血清、血液、體液、動、植物組織等類型的標本。


產品性能:
▲ 最大加樣量:1000ul
▲ 最大樣品數:32檢測/每批
▲ 操作時間:30-50min/每批
▲ 程式編輯,U盤導入導出功能
▲ 彩色全觸控屏幕操作
▲ 具有可調節的加熱功能
▲ 可定時開關的紫外光殺菌功能    
尺寸:42cm(h)×43cm(d)×45cm(w)


2、生物安全柜

本系統是力康生物醫療科技控股集團生產的生物安全柜,產品獲得了CFDA、NSF49、EN12469-GS三個不同標準的認證證書,是中國同時獲得此三項認證的品牌,該企業為中國生物安全柜標準的主要制定和修訂方之一。


HFsafe-LC生物安全柜產品性能:
▲ 采用AAF/confil ULPA超高效空氣過濾器,獨家過濾器條形碼顯示報警專利技術。
▲ 德國原裝EBM品牌自感應變頻風機,與微風速傳感器聯動控制,壽命長,噪音低;
▲ 采用熱式微風速傳感器實時監控風速,多點測量,具有節能風速運行模式;
▲ 認真執行KI-Discuss人員保護測試的品牌,人員保護性能是國際標準;
▲ 具有豐富的實驗室外排管路系統與層流實驗室全自動聯動控制設計經驗。

3、潔凈工作臺
本系統是力康生物醫療科技控股集團生產的新一代潔凈工作臺。


AlphaClean1300產品性能:
▲ 雙重監控微風速傳感器控制風速
▲ 整塊式帶條形碼過濾器壽命監控
▲ 標配門鎖安全設計,便于設備管理
▲ 彩色屏多參數顯示,具有預約功能
▲ 質保兩年(耗材除外),本地服務

4、X960全自動醫用PCR分析系統(熒光定量PCR儀)
本系統是力康生物醫療科技控股集團生產的實時熒光定量PCR,產品獲得了CFDA三類醫療器械注冊證,該品牌生產工廠屬國家高新技術企業,自2006年開始研發和生產PCR儀,產品性價比較高。


產品性能:
▲ 獨家雙光釬光路設計,信號無干擾,檢測結果準確;
▲ 進口半導體溫控和電源控制,升降溫速度達到5℃/s,溫度穩定性好
▲ 高分辨工業級CCD同步信號采集
▲ 自帶Wifi模塊,多種數據連接方式,可遠程操控
▲ 滿足用戶相對/絕對定量、溶解度曲線分析、HRM、SNP等功能需求。
 
5、T960梯度PCR儀
本系統是力康生物醫療科技控股集團生產的普通/梯度PCR,產品獲得了CFDA二類醫療器械注冊證,該品牌生產工廠屬國家高新技術企業,自2006年開始研發和生產PCR儀,產品性價比較高。


產品性能:
▲ 7英寸彩色觸屏操作
▲ 俄羅斯進口制冷片,使用壽命長
▲ 多重模塊自行更換,標配鍍金模塊,升溫速度快(達到5℃/s)
▲ 智能化網絡化程度高,可遠程操控
▲ 整機質保五年,本地化售后服務

6、Neofuge13R高速冷凍離心機
本系統是力康生物醫療科技控股集團生產的臺式高速冷凍離心機,適用于分子生物學實驗室及檢測實驗室,產品獲得了CFDA一類醫療器械生產備案,該品牌生產工廠屬國家高新技術企業,性價比較高。


產品性能:
▲ 最高轉速≥15000 rpm,最大離心力≥22000*g,最大容量16*5ml
▲ 旋鈕式參數設置,彩色屏多參數顯示;
▲ 氣密性可消毒生物安全防護轉子,可自動識別轉子;
▲ 具有快速預制冷功能,室溫到4℃時間<6分鐘
▲ 可實時修改參數,具有雙倒計時功能
▲ 整機質保兩年,本地化售后服務


7、Smart超純水機
本系統是力康生物醫療科技控股集團生產的臺式超純水機,自來水進水直接產純水和超純水,一機兩用,外觀漂亮,性價比較高。


產品性能:
▲ 整機全塑模具,可自行便捷更換耗材;
▲ 專利多功能水箱,確保水質穩定;
▲ 配備移動取水手柄,可遠程移動取水;
▲ 采用原裝進口耗材,如RO膜、樹脂等確保水質;
▲ 具有耗材失效報警功能;
▲ 質保兩年(耗材除外),本地售后服務
 
8、低溫冷鏈產品
產品涵蓋:藥品保存箱、-25/-40℃低溫冰箱、-86℃超低溫冰箱。


超低溫冰箱產品性能:
▲ 雙機復疊技術,可選雙系統
▲ 第二代VIP技術,保溫效果好
▲ 380L容積噪音低至50分貝
▲ 中間換熱器外置,維護方便
▲ 報警功能齊全,使用無憂
      
試劑情況:
可選華大基因、達安基因、萬孚生物、碩世生物等上市專業試劑公司的試劑,請注意臨床使用的需選擇具有注冊證的試劑產品。


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